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冷凍細胞操作步驟：

1．收集對數生長期細胞；
2．以25μl臺盼藍溶液稀釋25μl細胞懸液；用血球計數板計數并計算細胞存活率（至少應該在90%以上）；
3．細胞懸液在4℃ 條件下200磄離心10分鐘；
4．將沉淀的細胞重新懸浮在冷凍液中（大約5?06細胞/0.5 ml 冷凍液）；
5．將細胞懸液加入到冷凍管中，每管0.5 ml；
6．將冷凍管置于-80℃冰箱中；
7．24小時后，將冷凍管移入液氮罐中；
8．在記錄本或電腦中記錄下每一個冷凍管的位置以確保在以后應用時能夠找到每一個冷凍管。

傳代方法：
收到細胞后，取出培養瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。 （一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整 個瓶消毒后放到超菌 臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，僅留下 10ml培養液在瓶內繼 續培養。
（二）如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：
1. 棄去培養液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中， 倒轉放于37度培養箱1-3分鐘預熱，然后又 將培養瓶倒轉大約30 秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分 散，輕敲幾下培養 培養瓶，細胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養基，吸出，分到新的培養瓶中。1:3~1:6 傳代；2~3天1次。