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細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟：
1．將冷凍管迅速由液氮轉(zhuǎn)入到37℃水浴中，冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染，不定時(shí)攪拌加速解凍；
2．當(dāng)細(xì)胞*解凍后，用含70%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒；
3．將解凍后細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含4℃預(yù)平衡培養(yǎng)液的試管中；
4．細(xì)胞懸液在4℃下200磄離心10分鐘；
5．棄上清，將細(xì)胞重新懸浮在新鮮培養(yǎng)液中；
6．將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，CO2孵箱中培養(yǎng)；
7．是用倒置顯微鏡檢查細(xì)胞存活率以及細(xì)胞密度，如果細(xì)胞密度過高，用培養(yǎng)液稀釋至適宜濃度。

培養(yǎng)條件：
*培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基90%；胎牛血清10%。
培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide（CO2）,5%

傳代方法：
收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。 （一）如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整 個(gè)瓶消毒后放到超菌 臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下 10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼 續(xù)培養(yǎng)。
（二）如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中， 倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又 將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30 秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分 散，輕敲幾下培養(yǎng) 培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6 傳代；2~3天1次。